La saison 1999-2000 du Championnat de Tunisie de football était la 45e édition de la première division tunisienne à poule unique, la Ligue Professionnelle 1. Les douze meilleurs clubs tunisiens jouent les uns contre les autres à deux reprises durant la saison, à domicile et à l'extérieur. En fin de saison, les deux derniers du classement sont relégués et remplacés par les deux meilleurs clubs de Ligue Professionnelle 2.
L'Espérance sportive de Tunis, double tenant du titre, décroche le 15e titre de champion de Tunisie de son histoire en terminant en tête du classement, avec 7 points d'avance sur l'Étoile sportive du Sahel et 25 sur le CS sfaxien. Elle termine la saison invaincue (19 victoires, 3 nuls) en encaissant seulement 7 buts en 22 rencontres.